Однако Austin и Braden (1953) в экспериментах на кроликах установили, что избыточные сперматозоиды попадают преимущественно в стареющую яйцеклетку или в яйцеклетку, находящуюся в нетипичных, неблагоприятных условиях (например, в искусственной питательной среде или солевом растворе in vitro). Известно, что старение яйцеклетки происходит чрезвычайно быстро, у грызунов уже через несколько часов после овуляции, у человека — к концу первых суток, у крупного рогатого скота — на вторые сутки после овуляции. Austin и Braden показали на большом статистически обработанном материале, что чем старше яйцеклетка, тем легче и тем в большем количестве в нее проникают избыточные сперматозоиды. В наиболее благоприятных условиях, in situ и при участии молодой полноценной яйцеклетки, в последнюю проникает, как правило, только один сперматозоид. Таким образом, осеменение у млекопитающих следует считать моноспермным. Для нормального развития зародыша необходимо и достаточно участие в оплодотворении одного мужского и одного женского пронуклеусов, образование лишних нронуклеусов, как это экспериментально показано для представителей низших позвоночных, ведет к быстро наступающим отклонениям развития от нормы и к гибели зародыша. Изменения, наступающие в яйцеклетке млекопитающих и человека после оплодотворения, изучены пока крайне недостаточно. Dalcq (1951, 1952) и Izquierdo (1955) отметили, что у мыши и крысы после оплодотворения на стадии пронуклеусов метахромазия при окраске толуидиновым синим появляется на уровне скопления околоядерных митохондрий, где она до того не наблюдается.